Umfassende Strategie für die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie: von den Prinzipien bis zu den betrieblichen Vorsichtsmaßnahmen

Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine Analysetechnik, bei der Flüssigkeit als mobile Phase verwendet wird. Es pumpt ein einzelnes Lösungsmittel oder gemischte Lösungsmittel, Puffer und andere mobile Phasen durch ein Hochdruckinfusionssystem in eine Chromatographiesäule, die eine stationäre Phase enthält. Innerhalb der Chromatographiesäule werden Komponenten in der Probe aufgrund unterschiedlicher Wechselwirkungskräfte mit der stationären Phase und der mobilen Phase effektiv getrennt. Anschließend gelangen diese getrennten Komponenten zur detaillierten Analyse in den Detektor und ermöglichen so eine umfassende Analyse der Probe.

Das Prinzip beruht auf dem Unterschied im Verteilungsverhältnis der Mischung zwischen Flüssigkeit-Feststoff oder zwei nicht mischbaren Flüssigkeiten. Diese Methode eignet sich besonders für die Analyse hochsiedender, schwer verdampfbarer, thermisch instabiler und biologisch aktiver Substanzen. Gleichzeitig hat sich die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie auch in der chiralen Analyse als weit verbreitet erwiesen und bietet wichtige technische Unterstützung für die Forschung in den Bereichen Chemie, Biologie und Medizin.

Arbeitsschritte der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

Starten des Geräts: Schalten Sie zunächst nacheinander die Netzschalter des Computers und des Chromatographen ein, um das Gerät zu starten.

Bei der Workstation anmelden: Melden Sie sich bei der Flüssigkeitschromatographie-Workstation an, um sich auf nachfolgende Vorgänge vorzubereiten.

Konfiguration und Parametereinstellung: Nehmen Sie nach Auswahl der Gerätekonfiguration die erforderlichen Parametereinstellungen vor, z. B. mobiles Phasenverhältnis, Detektorempfindlichkeit usw.

Selbsttest des Instruments und Festlegung der Methode: Starten Sie den Selbsttest des Instruments, um sicherzustellen, dass das Instrument in gutem Zustand ist. Etablieren Sie nach bestandenem Selbsttest entsprechende Methoden anhand experimenteller Anforderungen.

Systembalance: Bevor Sie mit der Datenerfassung beginnen, stellen Sie sicher, dass das System für einen bestimmten Zeitraum unter festgelegten Bedingungen läuft, um einen ausgeglichenen Zustand zu erreichen.

Datenerfassung: Wenn die Basislinie stabil ist, führen Sie eine manuelle Injektion durch. Klicken Sie auf der Datenerfassungsoberfläche auf das Startsymbol, um mit der Datenerfassung zu beginnen. Speichern Sie nach der Sammlung die Chromatographiedatei.

Datenanalyse und Berichtsausgabe: Wählen Sie die Datenanalysefunktion auf der Hauptoberfläche aus und öffnen Sie die Chromatographiedatei zur Verarbeitung und Analyse. Nach Abschluss der Analyse wird der Bericht ausgegeben und der Test beendet.

Herunterfahren und Reinigen: Lassen Sie die Maschine vor dem Herunterfahren ausreichend lange laufen und waschen Sie die Säule vollständig mit der mobilen Phase, um sicherzustellen, dass keine Rückstände vorhanden sind, bevor Sie die Maschine herunterfahren.

Vorsichtsmaßnahmen für die Verwendung der Flüssigkeitschromatographie

Sicherer Betrieb: Vermeiden Sie immer den direkten Kontakt Ihrer Hände mit der Nadel und Bereichen, die mit der Probe in Kontakt kommen könnten, um die persönliche Sicherheit und die Sauberkeit des Instruments zu gewährleisten.

Nadelwaschvorgang: Vor dem Ansaugen einer Probe sollte die Nadel sorgfältig mit Ethanol oder Methanol gewaschen werden, um mögliche Verunreinigungen oder Rückstände zu entfernen.

Luftblasen beseitigen: Stellen Sie sicher, dass bei der Probenahme mit der Spritze keine Luftblasen eingemischt werden. Luftblasen können entfernt werden, indem Sie die Nadel nach oben richten und das Nadelrohr bewegen und dabei die entsprechende Sauggeschwindigkeit beibehalten.

Einführgeschwindigkeit und -tiefe: Das Einführen sollte schnell und stabil erfolgen, um sicherzustellen, dass die Geschwindigkeit und Tiefe jeder Probeninjektion konstant bleibt, was der Schlüssel zur Gewährleistung der Genauigkeit der Analyseergebnisse ist.

Probeninjektion: Wenn die Nadelspitze bis zur Mitte in die Verdampfungskammer eingeführt wird, sollte mit der Probeninjektion begonnen werden, um sicherzustellen, dass die Probe vollständig verdampft und effektiv analysiert werden kann.

Auf Luftlecks prüfen: Wenn sich herausstellt, dass der Druck in der Vergasungskammer sinkt, die Spitzenform kleiner wird oder die Breite größer wird, kann dies an einer Luftleckage liegen. Zu diesem Zeitpunkt sollte der Dichtungsring rechtzeitig ausgetauscht werden, um den normalen Betrieb des Instruments wiederherzustellen.

Einteilung der Injektionsnadeln: Die Injektionsnadeln von Gas- und Flüssigkeitschromatographen sind nicht mischbar. Gaschromatographen verwenden spitze Nadeln, während Flüssigkeitschromatographen flache Nadeln verwenden. Das Mischen kann zu Geräteschäden oder ungenauen Analyseergebnissen führen.

Parameterstabilität: Während des Testprozesses sollte die Stabilität der Instrumentenparameter aufrechterhalten und Parameter nach Belieben vermieden werden, um die Genauigkeit der Analyseergebnisse sicherzustellen.

Datensicherheit: Verwenden Sie zum Kopieren von Daten nicht Ihren eigenen USB-Stick, um die Datensicherheit und -integrität zu gewährleisten.